液相色譜儀是有哪些部分組成-色譜儀_氣相色譜儀_液相色譜儀-滕州市惠譜分析儀器有限公司
一套液相色譜系統大致分為五個(gè)部分:流動(dòng)相前處理部分、輸液部分、進(jìn)樣部分、分離部分和檢測部分。
一、流動(dòng)相前處理部分
流動(dòng)相前處理主要包括過(guò)濾和脫氣,使用設備主要為溶劑過(guò)濾器、真空泵和超聲波。
1.過(guò)濾。HPLC所用流動(dòng)相必須預先過(guò)濾和脫氣,過(guò)濾的作用是防止顆粒性的雜質(zhì)堵塞系統,或影響單向閥的正常工作。過(guò)濾時(shí)需要注意濾膜的選擇,油膜和水系膜必須分開(kāi)使用。水膜易有機溶劑溶解而進(jìn)入系統導致泵流路和色譜柱頭的堵塞。
2.超聲。超聲的作用是去除流動(dòng)相中的氣泡。超聲時(shí)間一般在20min即可。超聲后,液體溫度會(huì )升高,應冷卻到室溫再使用。超聲后的流動(dòng)相若需隔天使用再次超聲。
二、輸液系統
輸液系統即是指高壓恒流泵,其作用是能提供穩定準確的流速。
1.溶劑過(guò)濾頭。吸液過(guò)濾頭,或稱(chēng)沉子,主要作用是過(guò)濾流動(dòng)相中可能存在的顆粒性雜質(zhì)。長(cháng)時(shí)間使用后,雜質(zhì)有可能阻塞溶劑過(guò)濾頭上的過(guò)濾板孔隙;或長(cháng)時(shí)間使用緩沖液,過(guò)濾頭表面容易產(chǎn)生一層膜,阻礙流動(dòng)相正常通過(guò)。嚴重時(shí),即使是已超聲過(guò)的溶劑,泵吸液時(shí)也會(huì )有氣泡在四氟輸液管里產(chǎn)生,因此應經(jīng)常對過(guò)濾頭進(jìn)行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇或者30%稀硝酸溶液,正相系統需注意濾頭的烘干處理。
2.單向閥。單向閥的作用是確保液體向一個(gè)方向流動(dòng),是高壓恒流泵穩定輸液的保證。日常使用過(guò)程中,可以通過(guò)觀(guān)察壓力的情況,初步判斷流量是否正常。如果系統已經(jīng)平衡一段時(shí)間,壓力應該是穩定的。但如果壓力存在波動(dòng),則表明流量不穩定;如果無(wú)壓力,則表明無(wú)流量。這兩種情況大多是因為單向閥里混入了氣泡或雜質(zhì)?;烊霘馀莸那闆r,應把放空閥打開(kāi),按沖洗鍵將里面的氣泡排出。單向閥混入雜質(zhì)的情況,須對其進(jìn)行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇,安裝時(shí)注意標記環(huán)的方向。
3.密封圈。密封圈是固定在柱塞桿上防止泵腔內的液體泄漏,是保證泵頭輸液正常的關(guān)鍵部件。但柱塞桿和柱塞密封圈長(cháng)期使用會(huì )發(fā)生磨損,主要與流量、操作壓力和所使用的流動(dòng)相有關(guān)。當使用含鹽的流動(dòng)相時(shí),由于脫水或蒸發(fā),可能形成鹽結晶,而泵運動(dòng)時(shí)鹽結晶會(huì )導致密封圈和柱塞桿的磨損。因此,每天實(shí)驗前和實(shí)驗后都需用純水沖洗一次密封圈(在柱塞密封圈和二級密封圈之間),保持清洗管內有水以防止形成晶體,延長(cháng)柱塞桿和密封圈的使用壽命。 
4.在線(xiàn)過(guò)濾器。為了防止由于流動(dòng)相雜質(zhì)微粒進(jìn)入色譜系統,泵在放空閥內安裝了在線(xiàn)過(guò)濾器,經(jīng)泵出口流出的液體通過(guò)在線(xiàn)過(guò)濾器,經(jīng)排空管流出的液體不通過(guò)在線(xiàn)過(guò)濾器。儀器使用一定時(shí)間后,建議用戶(hù)清洗在線(xiàn)過(guò)濾器的燒結不銹鋼過(guò)濾片。用扳手卸下壓帽,將密封環(huán)和燒結不銹鋼過(guò)濾片一同取出清洗,清洗后按原位裝上。清洗溶劑可以選擇30%稀硝酸溶液,正相系統需注意濾頭的烘干處理。
三、進(jìn)樣系統
進(jìn)樣系統分為手動(dòng)進(jìn)樣閥和自動(dòng)進(jìn)樣器。
1.手動(dòng)進(jìn)樣閥。對于手動(dòng)進(jìn)樣閥使用過(guò)程中需要注意每個(gè)樣品進(jìn)樣完成后應對進(jìn)樣閥進(jìn)行清洗,防止殘留對下一個(gè)樣品分析的影響。還需要注意進(jìn)樣方式,以20μL定量環(huán)為例,我們可以選擇完全充滿(mǎn)定量管或部分充滿(mǎn)定量管。為了保證進(jìn)樣的重復性,選擇完全充滿(mǎn)定量管進(jìn)樣方式時(shí),需要注入定量環(huán)體積3倍以上的樣品;選擇部分充滿(mǎn)定量管進(jìn)樣方式時(shí),進(jìn)樣體積應在定量管體積一半以下,即1-10μL。
2.自動(dòng)進(jìn)樣器。如果采用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣,首先需要保證注射器里面沒(méi)有氣泡存在,否則影響進(jìn)樣量準確性;其次是樣品瓶里面有足夠的樣品,保證進(jìn)樣針能夠吸到樣品。為了避免交叉污染需要定期對樣品瓶、蓋和墊進(jìn)行清洗。若自動(dòng)進(jìn)樣器長(cháng)時(shí)間不使用,應該注意:腐蝕性的流動(dòng)相或洗液(例如,堿性或酸性緩沖溶液)必須完全從系統中置換出來(lái)。同時(shí),為了避免細菌的生長(cháng),應將一個(gè)樣品瓶中充滿(mǎn)甲醇,并重復幾次進(jìn)樣操作。
四、分離系統
分離系統包括色譜柱、保護柱以及柱溫箱。
1.色譜柱。色譜柱是樣品分離的核心。色譜柱在使用前必須仔細閱讀說(shuō)明書(shū),了解色譜柱使用的pH值范圍、溶劑耐受范圍、壓力范圍和維護方法等事項。色譜柱使用完后,需及時(shí)對色譜柱進(jìn)行沖洗。沖洗完成后,應該將色譜柱從儀器上拆下來(lái),兩端用廠(chǎng)家配的堵頭密封后,保存在色譜柱盒里。
2.保護柱。保護柱的作用主要是防止吸附性強的雜質(zhì)對色譜柱污染,從而延長(cháng)色譜柱的壽命。針對不同型號的色譜柱,應選擇相對應填料的保護柱。應注意柱芯也是有壽命的,應該定期進(jìn)行更換。
3.柱溫箱。色譜柱溫度變化,可能會(huì )導致保留時(shí)間的變化。為了避免這個(gè)問(wèn)題,建議使用柱溫箱。
五、檢測系統
HPLC常用的檢測器是紫外檢測器。在日常使用過(guò)程中紫外檢測器主要需要注意檢測池和氘燈的使用與維護。
1.檢測池。檢測池長(cháng)時(shí)間使用可能會(huì )造成污染,如果儀器的參比能量(REF ENERGY)正常,測量能量(SMPENERGY)偏低,可能為檢測池污染導致,可以對檢測池進(jìn)行清洗。對檢測池零件的進(jìn)行清洗,一般先采用約1:4的硝酸溶液超聲清洗,分別用純水和甲醇溶液清洗,然后重新組裝并將檢測池池體推進(jìn)池腔內,擰緊池板螺絲。注意組裝中,池玻璃及墊片一定要放正,以免壓碎池玻璃,造成檢測池泄漏。
2.氘燈。氘燈正常使用壽命可在1500小時(shí)以上。燈的使用壽命與檢測器的使用時(shí)間和開(kāi)啟頻率有關(guān),因此使用過(guò)程中應盡量節省不必要的開(kāi)機時(shí)間,減少開(kāi)關(guān)頻率,以延長(cháng)氘燈的使用壽命。如果準確地判斷出氘燈已經(jīng)不能點(diǎn)亮或能量太低,則需要更換新的氘燈。在購買(mǎi)氘燈時(shí),應注意咨詢(xún)和核對氘燈的型號與儀器型號是否匹配。更換到氘燈時(shí),參照儀器說(shuō)明書(shū)中的相關(guān)內容,特別要注意氘燈連接線(xiàn)的位置順序。